接下来几天,吴哲就埋头进了实验室里。开心网络这边本来两天后就要举行拍卖会的,可国内的一些投资机构纷纷要求把拍卖会安排在了元旦前一天,让他们可以有更多的时间能筹集资金。郭子宜在请示了吴哲后,也同意了这一要求。
吴哲没怎么放心上,他这边终于是把程序给搞了出来,然后把程序丢给了郑义仲。让他不停地输入前面的实验数据,检验正确率。
而他则开始穿着无菌服在实验室里面做起了Sanger测序。他被唐梦带着做了两次后,就能自己独立操作了。
先利用DNA聚合酶来延伸结合在待定序列模板上的引物。直到掺入一种链终止核苷酸为止。
每一次序列测定由一套四个单独的反应构成,每个反应含有所有四种脱氧核苷酸三磷酸(dNTP),并混入限量的一种不同的双脱氧核苷三磷酸(ddNTP)。由于ddNTP缺乏延伸所需要的3-OH基团,使延长的寡聚核苷酸选择性地在G、A、T或C处终止。
终止点由反应中相应的双脱氧而定。每一种dNTPs和ddNTPs的相对浓度可以调整,使反应得到一组长几百至几千碱基的链终止产物。
它们具有共同的起始点,但终止在不同的核苷酸上,可通过高分辨率变性凝胶电泳分离大小不同的片段,凝胶处理后可用X-光胶片放射自显影进行检测。
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